iGENEA Metoda analityczna

Metoda analityczna

Pobiera się wacik z błony śluzowej jamy ustnej; wacik umieszcza się w roztworze buforowym, aby zapobiec zepsuciu próbki.

Po przybyciu i zarejestrowaniu próbek w FamilyTreeDNA w Houston (USA), próbki i wszelkie ważne informacje dodatkowe są przekazywane do laboratorium (Genomics Research Center) w celu ich przetworzenia.

W celu wyekstrahowania DNA z próbki wymazu, do każdej próbki dodaje się enzym (proteinaza K) w celu rozerwania komórek i uwolnienia DNA w roztworze. Bardzo podobną procedurę stosuje się w przypadku próbek kryminalistycznych, takich jak wylizane stempelki lub zęby. Kawałek stempla umieszczany jest w roztworze buforowym proteinazy. Wszystkie próbki są inkubowane przez noc (podgrzewane do temperatury 56 °C) i wstrząsane w celu ułatwienia podziału komórek.

Kod kreskowy nowej płytki do przechowywania DNA jest skanowany i umieszczany w robocie pipetującym. Poszczególne próbki od klientów są również skanowane. Robot zawsze przenosi 8 próbek jednocześnie na jedną płytkę w celu pobrania do 96 próbek. Płyta ta zawiera już roztwór zawierający maleńkie kule magnetyczne. Magnetyczny roztwór DNA jest dobrze wymieszany tak, że DNA, które jest ujemnie naładowane, jest przyciągane przez dodatnio naładowane kulki magnetyczne.

Płyta jest umieszczana na statywie magnetycznym, a roztwór buforowy jest ostrożnie usuwany. Koraliki magnetyczne z DNA są myte i w końcu \"bufor do przechowywania DNA\" jest pipetowany do każdego z 96 dołków. Płyta umieszczana jest na bloku grzejnym i podgrzewana do temperatury 65ºC. DNA oddziela się od kul magnetycznych i przechodzi do bufora do przechowywania.

Otwiera się płyta magazynowa z 96 oddzielnymi zbiornikami (pojedyncze rury z niebieskimi pokrywami). Bufor, który teraz zawiera DNA, jest przenoszony do poszczególnych probówek w celu przechowywania. Rurki są ponownie uszczelnione.

Cały dysk jest skanowany. Każda pojedyncza rura ma swój kod kreskowy na spodzie. Każdy numer próbki jest jednoznacznie przypisany do kodu kreskowego i przechowywany w bazie danych REMP. Płytka zawierająca próbki DNA jest przechowywana w temperaturze -20 °C w systemie zamrażarki.

Próbki do analizy są \"zamawiane\" z bazy danych REMP. Poszczególne rury z płyt łożyskowych są wykrawane w \"płytę dostawczą\". Kody kreskowe poszczególnych probówek są ponownie skanowane do kontroli, a przygotowana mieszanina substancji chemicznych i barwników do analizy DNA (mieszanka primera) jest prezentowana na 96 płytce PCR przez robota pipetującego. Bardzo niewiele rozmrożonego roztworu DNA jest pipetowane do mieszaniny PCR, a płytka jest zamykana folią. Płytkę umieszcza się w urządzeniu PCR i uruchamia się program do powielania i \"barwienia\" DNA. DNA jest \"kopiowane\" w etapach ogrzewania i chłodzenia. Po około 3 godzinach PCR jest zakończony, a produkty PCR są gotowe do sekwencjonowania lub elektroforezy.

Produkty PCR do analizy mitochondrialnego DNA (mtDNA), na przykład, muszą być ponownie oczyszczone przed elektroforezą, która jest wykonywana przez robota. Produkty PCR są następnie przenoszone do 16 płytek nośnikowych z 96 próbkami na sekwencer i umieszczane w urządzeniu do elektroforezy.

W urządzeniu każda próbka DNA \"migruje\" przez kapilarę wypełnioną żelem (polimerem), do którego przyłożone jest dodatnie napięcie (elektroda). Małe cząsteczki mogą migrować przez żel szybciej niż większe cząsteczki. DNA jest sortowane według \"rozmiaru\" i rejestrowane przez kamerę przy użyciu oznaczeń kolorystycznych.

Kolejność szczytów czerwonego, niebieskiego, zielonego i czarnego daje sekwencję (specyficzną dla danej osoby) mtDNA.

Drugą możliwością jest rejestracja pojedynczych szczytów (Short Tandem Repeats STR) np. w analizie haplotypu Y-chromosomalnego człowieka.

Dane z analizy są oceniane przez oprogramowanie i ponownie sprawdzane przez naukowca. W kilku wątpliwych lub szczególnie nietypowych przypadkach międzynarodowa grupa naukowców pracujących w FamilyTreeDNA, składająca się z biologów i biotechnologów, którzy zajmują się analizą DNA i genetyki od ponad 15 lat, konsultuje się ze sobą.

Tak działa analiza pochodzenia DNA

Jedna próbka salivy jest wystarczająca do uzyskania Twojego DNA. Próbkowa kolekcja jest prosta i bezbolesna i może być wykonywana w domu. Do przesłania próbek należy użyć koperty dołączonej do zestawu do pobierania próbek.